小分子化合物的作用是作為蛋白質(zhì)合成抑制劑,通過抑制蛋白質(zhì)合成來抑制細菌、藻類原生物和哺乳動物細胞的生長,作用機制:嘌呤霉素是由白黑鏈霉菌發(fā)酵代謝產(chǎn)生的一種氨基糖苷類抗生素。其作用機制在于,嘌呤霉素是氨酰-tRNA分子3’末端的類似物,能夠與核糖體的A位點結(jié)合并摻入到延伸的肽鏈中。然而,嘌呤霉素同A位點結(jié)合后,不會參與隨后的任何反應(yīng),從而導致蛋白質(zhì)合成的提前終止并釋放出C-末端含有嘌呤霉素的不成熟多肽。
小分子化合物應(yīng)用場景:
1.細胞穩(wěn)轉(zhuǎn)株篩選:
嘌呤霉素產(chǎn)生菌Streptomyces alboniger內(nèi)發(fā)現(xiàn)的pac基因編碼嘌呤霉素N-乙酰轉(zhuǎn)移酶(PAC),賦予機體對嘌呤霉素產(chǎn)生抗性。這一特性如今普遍應(yīng)用于篩選特定攜帶pac基因質(zhì)粒的哺乳動物穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細胞株。
在細胞穩(wěn)轉(zhuǎn)株篩選中,嘌呤霉素的普遍應(yīng)用與慢病毒載體的特性有關(guān)。現(xiàn)在商業(yè)化的慢病毒載體多數(shù)都攜帶pac基因,使得篩選過程更加高效和準確。
在某些特定情況下,嘌呤霉素亦可以用來篩選轉(zhuǎn)化攜帶pac基因質(zhì)粒的大腸桿菌菌株。
2.實驗研究:
嘌呤霉素可用于研究蛋白質(zhì)合成過程,通過觀察其對蛋白質(zhì)合成的影響,進一步揭示蛋白質(zhì)合成的機制和調(diào)控途徑。
在細胞生物學、分子生物學等領(lǐng)域的研究中,嘌呤霉素也常被用作實驗工具,以探究細胞生長、分化、凋亡等生命過程。
小分子化合物使用注意事項:
1.濃度控制:嘌呤霉素的有效篩選濃度跟細胞類型、生長狀態(tài)、細胞密度、細胞代謝情況及細胞所處細胞周期位置等有關(guān)。為了篩選到穩(wěn)定表達的細胞株,需要確定殺死未轉(zhuǎn)染/轉(zhuǎn)導細胞的低濃度嘌呤霉素。
2.操作安全:嘌呤霉素為有毒化合物,操作時請小心拿放,并穿實驗服、戴一次性手套等防護措施。
3.儲存條件:嘌呤霉素應(yīng)儲存于-20℃凍存條件下,以保持其穩(wěn)定性和活性。
