Western blotting荧光检测ECL超敏发光液
货号 ：PE0010
规格 ：25ml/100ml
保存 ：4℃密封避光保存有效期一年以上。25℃室温放置数月不影响质量
ECL Plus 超敏发光液直接或间接检测与辣根过氧化物酶 HRP 关联的蛋白或核酸底物。

Western blotting荧光检测ECL超敏发光液
货号 ：PE0010 
规格 ：25ml/100ml
保存 ：4℃密封避光保存有效期一年以上。25℃室温放置数月不影响质量。

产品简介 ：
    ECL Plus 超敏发光液直接或间接检测与辣根过氧化物酶 HRP 关联的蛋白或核酸底物。这一*的发光底物系统是目前灵敏的商业化荧光 ECL 检测试剂，具有灵敏度和高信噪比，可检测出 10-100 fg 的微量抗原；发光迅速，荧光可使 X 感光胶片感光达 12 小时以上，特别适用于痕量蛋白或核酸检测。同时该试剂允许使用更高的抗体稀释倍数（1：2000-1：10000），极其节省抗体。
用途：用于 HRP 标记抗体的 Western Blot 和 HRP 标记探针的核酸杂交。
安全性：无特殊毒性，按普通化学品处理。

    经过PAGE分离的蛋白质样品，转移到固相载体(例如硝酸纤维素薄膜)上，固相载体以非共价键形式吸附蛋白质，且能保持电泳分离的多肽类型及其生物学活性不变。以固相载体上的蛋白质或多肽作为抗原，与对应的抗体起免疫反应，再与酶或同位素标记的第二抗体起反应，经过底物显色或放射自显影以检测电泳分离的特异性目的基因表达的蛋白成分。该技术也广泛应用于检测蛋白水平的表达。Western blotting 检测系统除需要过氧化物酶标记的各种二抗外，还需要配套的显色试剂。索莱宝提供DAB显色和ECL化学发光两种试剂及相应试剂盒。

使用方法 ：
    1、常规电泳、转膜、HRP 标记抗体或核酸探针孵育、洗膜。注意用 HRP 标记 IgG 或用一抗-链亲和素-生物素-HRP 夹心法。核酸杂交膜用 HRP 标记探针杂交，洗膜。
    2、在洗涤膜上的 HRP 标记二抗的同时，新鲜配制发光工作液：分别取等体积的溶液 A 和 B 混合，放置使之恢复室温否则会减弱荧光强度。建议立即使用工作液，室温放置数小时后仍可使用但灵敏度略有减低。
    3、用镊子取出膜，搭在滤纸上沥干洗液但勿使膜*干燥。将膜*浸入并与发光工作液充分接触（约0.125ml 发光工作液/cm 2 膜）。室温孵育 3 分钟后立即压片曝光。孵育时间过长不会增加灵敏度，有时还会导致曝光条带异常。发光过程的本质是酶促反应，使用过少的发光工作液不利于反应进行，也会导致膜上条带曝光不均匀和灵敏度明显降低。为达节约目的可将膜剪小但勿降低发光液用量。
    4、用镊子夹起膜，搭在滤纸上沥干发光工作液。但勿洗去发光液。
    5、在 X 光胶片暗盒内面铺一张面积大于膜的保鲜膜。将杂交膜贴在保鲜膜上，将保鲜膜折起来*包裹杂交膜，去除气泡和皱褶，可剪去边缘部多余的保鲜膜。用滤纸吸去多余的发光工作液。用胶带将覆盖杂交膜的保鲜膜固定在暗盒内，好蛋白带面向上。
    6、在黑暗中放入 X 感光胶片，分别曝光不同的时间如数秒到数分钟。显影冲洗。
 

注意事项 ：
    1、步骤 1-5 可在日光灯下操作；但发光液暴露于强光下时间过久灵敏度可能略有降低，移到暗房操作可避免。戴手套可以避免在膜上留下手印，保持膜的洁净。
    2、长时间曝光或蛋白质过量，将加深背景并使条带强弱变化失去线性关系。曝光不足则条带模糊。
    3、 发光工作液孵育约 3 分钟后膜上的条带发光。 强条带发光在暗房中肉眼可见， 低丰度蛋白条带发光较弱，肉眼虽不可见但能使 X 胶片曝光。不能单凭肉眼观察判断条带发光时间。肉眼不可见的荧光实际上可持续数小时并使 X 胶片感光，因而弱带可曝光 1-10 小时。如果曝光后条带不佳，可用洗膜缓冲液洗膜，重新孵育二抗，然后重新用 ECL 发光和曝光。
    4、 由于超敏发光液的高灵敏度， 强烈推荐大多数进口抗体起始浓度为一抗 1： 1000-1： 4000， 二抗 1： 2000-1：5000。抗体浓度过高将造成高背景或没有条带，导致失败！
    5、某些市售保鲜膜包裹印迹膜时会淬灭荧光，应选择高质量保鲜膜，例如“克林莱”牌保鲜膜。
   6、 使用肉眼可见的预染色蛋白 Marker 和荧光-放射自显影曝光标签可帮助确定胶片上条带的准确位置和大小。
   7、NaN3 能抑制 HRP 活性，回收二抗时应避免使用 NaN3，如必需使用勿超过 0.01%。 
 

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参考文献：
《Glutamine Enhances the Hypoglycemic Effect of Insulin in L6 Cells via Phosphatidylinositol-3-Kinase (PI3K)/Protein Kinase B (AKT)/Glucose Transporter 4 (GLUT4) Signaling Pathway》 作者:Caijuan Wang, Yujiao Deng, Yenan Yue, Wenting Chen, Yu Zhang, Guifang Shi, and Zhongming Wu 期刊:Medical Science Monitor 影响因子:1.98 PMID:29491345
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