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专注于生物学试剂及试剂盒领域
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产品型号：BC4070-50T/24S
更新时间：2024-04-12
厂商性质：生产厂家
访 问 量 ：896
010-50973130
产品分类
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单宁酶活性检测试剂盒说明书
紫外分光光度法
注意：本产品试剂有所变动，请注意并严格按照该说明书操作。
货号：BC4070
规格：50T/24S
产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致，有疑问请及时联系索莱宝工作人员。
| 试剂名称 | 规格 | 保存条件 |
| 提取液 | 液体75 mL×2瓶 | 2-8℃保存 |
| 试剂一 | 粉剂×2支 | 2-8℃保存 |
| 标准品 | 粉剂×1支 | 2-8℃保存 |
溶液的配制：
试剂一：临用前取1支加入1.5 mL无水乙醇混匀溶解，用不完的试剂可以2-8℃保存一周；
标准品：5 mg没食子酸丙酯。临用前加入1.178 mL无水乙醇充分混匀溶解，配成20 μmol/mL的标准溶液，2-8℃保存两周。
产品说明：
单宁酶全称是单宁酯酰水解酶(Tannase，EC 3.1.1.20)，存在于富含单宁的植物，也广泛存在于微生物中，可以水解酯键和缩酚羧键，生成没食子酸和葡萄糖。
使用没食子酸丙酯（PG）作为单宁酶酶促反应的底物，其在270nn下有特征吸收峰，根据其反应前后吸光度的变化来计算单宁酶活力。
注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品：
紫外分光光度计、1mL石英比色皿、低温离心机、水浴锅、可调式移液器、超声破碎仪、研钵/匀浆器、乙醇、冰和蒸馏水。
操作步骤：具体操作步骤详见“产品资料"附件
一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）
1、组织：称取约0.1g组织，加入1mL提取液，冰浴匀浆。10000rpm，4℃离心10min，取上清，置冰上待测。
2、细胞或细菌样本的制备：先收集细胞或细菌样本到离心管内，弃上清，按照每500万细胞或细菌加入1mL提取液，超声波破碎细菌或细胞（功率200W，超声3s，间隔10s，重复30次）。10000rpm，4℃离心10min，取上清，置冰上待测。
二、测定步骤
紫外分光光度计预热30min，波长调至270nm，蒸馏水调零。
标准液的稀释：取10μL 20μmol/mL的标准溶液，加入3990μL提取液，充分混匀，配制成0.05μmol/mL标准液使用，现用现配。（实验中每管需要1000μL，为减小实验误差，故配制大体积。）
对照管样本处理：吸取0.1mL样本于1.5mLEP管中作为对照管，沸水浴5min，冷却至常温待测。
加样表（在1.5mLEP管中分别加入）
| 试剂名称（μL） | 测定管 | 对照管 |
| 提取液 | 850 | 850 |
| 试剂一 | 50 | 50 |
| 样本 | 100 | 100（已灭活） |
| 混匀，置于40℃水浴锅中准确反应10min，立即沸水浴5min，冰浴冷却至常温。10000rpm，室温离心10min，取上清液待测。 | ||
| 上清液 | 50 | 50 |
| 提取液 | 950 | 950 |
| 充分混匀后测定270nm下的吸光度，分别记为A测定、A对照，计算ΔA测定=A对照-A测定。另取1000μL标准液于石英比色皿中，测定270nm处的吸光度，记为A标准。每个测定管需设一个对照管。标准管只需测1-2次。 | ||
注意事项：
如果A测定大于1.5，可以适当加大稀释倍数，保证总体积1mL不变，如20μL上清液和980μL提取液（相当于F=1000/20=50），计算公式中需改变F和V上清液的数值。
实验实例：
取0.1g玉兰叶加入1mL提取液进行匀浆研磨，取上清后按照测定步骤操作，测得计算ΔA测定=A对照-A测定=1.126-1.033=0.093，按样本质量计算酶活得：单宁酶（U/g质量）=1000×ΔA÷A标准÷W=1000×0.093÷0.609÷0.1=1527.09 U/g 质量。
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