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专注于生物学试剂及试剂盒领域
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产品型号：BC2230-50T/24S
更新时间：2024-04-08
厂商性质：生产厂家
访 问 量 ：4273
010-50973130
产品分类
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L-乳酸（L-LA）含量检测试剂盒说明书
可见分光光度法
注意：本产品试剂有所变动，请注意并严格按照该说明书操作。
货号：BC2230
规格：50T/24S
产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致，有疑问请及时联系索莱宝工作人员。
| 试剂名称 | 规格 | 保存条件 |
| 提取液一 | 液体30 mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
| 提取液二 | 液体5 mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
| 试剂一 | 液体20 mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
| 试剂二 | 液体60 μL×1瓶 | 2-8℃保存 |
| 试剂三 | 液体24mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
| 试剂四 | 粉剂×1瓶 | -20℃保存 |
| 试剂五 | 液体5 mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
| 标准品 | 粉剂×1支 | 2-8℃保存 |
溶液的配制：
试剂二：临用前按试剂二（V）：蒸馏水（V）=10μL：450μL的比例配制试剂二溶液，现用现配；
试剂四：临用前每瓶加入8 mL 蒸馏水混匀，可分装后-20℃保存，避免反复冻融，-20℃保存4周；
标准品：临用前加入1.04 mL蒸馏水配成100 μmol/mL 的标准溶液；2-8℃保存4周。
产品说明：
乳酸是生物体代谢过程中重要的中间产物，与糖代谢、脂类代谢、蛋白质代谢及细胞内能量代谢密切相关，乳酸含量是评估糖元代谢的和有氧代谢的重要指标。乳酸在乳酸脱氢酶的作用下生成*酸，同时使NAD+还原生成NADH和H+，H+传递给PMS生成的PMSH2还原MTT生成紫色物质，在570nm处有特征吸收峰。
技术指标：
低检出限：0.0387 μmol/mL
线性范围：0.039-1 μmol/mL
注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品：
天平、研钵/匀浆器、离心机、可见分光光度计、1mL玻璃比色皿、恒温水浴锅或者恒温培养箱、乙醇和蒸馏水。
操作步骤：具体操作步骤详见“产品资料"附件
注意事项：
如果测定吸光值超过线性范围吸光值，可以增加样本量或者稀释样本后再进行测定。
提取液一中含有蛋白质沉淀剂，因此上清液不能用于蛋白浓度测定。如需测定蛋白含量，需另取样本。
实验实例：
取0.1g兔心加入1mL提取液一进行匀浆研磨离心，取0.8mL上清后加0.15mL提取液二，离心取上清后稀释5倍，之后按照测定步骤操作，测得计算ΔA测定=A测定管-A对照管=1.137-0.125=1.012，根据标准曲线y=0.7826x+0.0215，计算x=1.266，按样本质量计算含量得：
L-LA含量（μmol/g 质量）=1.1875×x÷W×稀释倍数= 1.1875×1.266÷0.1×5=75.17 μmol/g质量。
取100μL小鼠血清加入1mL提取液一，取0.8mL上清后加0.15mL提取液二，离心取上清，之后按照测定步骤操作，测得计算ΔA测定=A测定管-A对照管=1.152-0.407=0.745，根据标准曲线y=0.7826x+0.0215，x=0.924，按照液体体积计算含量得：
L-LA含量（μmol/mL）= 13.0625×x=13.0625×0.924=12.07 μmol/mL。
相关发表文献：
Meixi Peng,Dan Yang,Yixuan Hou,et al.Intracellular citrate accumulation by oxidized ATM-mediated metabolism reprogramming via PFKP and CS enhances hypoxic breast cancer cell invasion and metastasis. Cell Death and Disease. March 2019;(IF5.959)
Xiaojin Luo,Weihua Shi，Haoming Yu,et al. Wearable Carbon Nanotube-Based BioSensors on Gloves for Lactate. Sensors. October 2018;(IF3.031)
Zhou F, Du J, Wang J. Albendazole inhibits HIF-1α-dependent glycolysis and VEGF expression in non-small cell lung cancer cells[J]. Molecular and cellular biochemistry, 2017, 428(1-2): 171-178.
参考文献：
[1] Jin Bingjun, Li Taiyuan, Zhang Chunfeng. Determination of lactic acid concentration in bovine blood by enzymatic method [J]. Chinese Journal of Veterinary Medicine, 1990, 16(07): 23-25. [2] Eolbergrová J, MacMillan V, Siesjö B K. The effect of moderate and marked hypercapnia upon the energy state and upon the cytoplasmic NADH/NAD+ ratio of the rat brain[J]. Journal of neurochemistry, 1972, 19(11): 2497-2505.
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